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微量血锌正常参考值及火焰原子吸收法测定

更新时间:2012-11-04    点击次数:4130

 

   在我国锌缺乏现象相当普遍。血清锌浓度测定是当前*的锌缺乏诊断试验。如果能够排除感染、发烧、创伤等应激反应,血清锌测定值可以反映体内锌总体水平。但这种方法用血量较多,儿童及其家长不愿接受。头发锌含量测定曾作为诊断锌缺乏的常用方法。头发样品的采集、运送、贮存、检测都较方便,易为儿童及其家长所接受。但洪昭毅等曾同时测定467例小儿血清和头发锌含量,结果显示二者无相关性。头发锌含量测定只能作为群体营养状况及环境污染的监测指标,不能作为锌缺乏的诊断指标。近年来,有学者相继探索微量、简易、快捷、灵敏、可靠的锌缺乏诊断方法。本室将有关报道加以综合、改进,建立了高灵敏微量进样火焰原子吸收法测定微量全血锌的方法,并应用该方法进行中国公共卫生专项调查,以期制订正常参考值。现报告如下。
    1
 对象与方法
    1.1
 对象 江西医学院护理系一年级120名女生,平均年龄18.6 ,zui小年龄17(16) ,zui大年龄21(2 。采血时皆无感染发烧等急性病表现,亦无严重慢性疾病。
    1.2
 方法 
    1.2.1
 静脉血采集 于早晨空腹时采集,血样离心分离血清,置冰箱备测。
    1.2.2
 全血样采集 于采静脉血的同时,用一次性毛细管取同一人指端未稍血20μl注入盛有1ml稀释液的聚乙烯塑料管中,并将附于毛细管壁的血洗净,加盖封紧置冰箱备测。
    1.2.3
 稀释液及标准液配制 配制0.1 %TritonX-100水溶液,用于稀释血样,并起增敏和抗干扰作用。用纯ZnO配制浓度为1000mg/LZn标准储备液0.1mol/ LHNO3) ,放于冰箱备用。测试前用0.05 %TritonX-100 逐级稀释配制标准工作液。
    1.2.4
 仪器测定条件 (1) 血清锌测定:所用仪器为原子吸收分光光度计, 采用火焰法。波长213.8 nm ,灯电流7mA ,狭缝1nm ,燃烧器高度7mm ,空气流量6.0L/ min ,乙炔流量1.0L/ min(2) 微量全血锌测定:设备条件同上。
    1.2.5
 测定方法 (1) 血清锌测定:取静脉血离心分离血清。取血清1ml0.1mol/ L HNO34 ml混匀。将仪器按1.2.4 (1)所述条件设定调试好。用重蒸馏水调零。将空白液及系列标准液依次喷入火焰,记录吸光度,绘制标准曲线。再将样品喷入火焰,记录吸光度,从标准曲线上查得待测样品的浓度。
    (2)
微量全血锌测定:向盛有全血的聚乙烯管中加入测试稀释液1 ml ,摇匀上机测试。即按选定的仪器测定参数,分别将标准溶液和试样溶液直接喷雾测定吸光度。标准溶液标准工作液系列浓度为:0 ,50 ,100 ,150 ,200μg/ L 。曲线绘制及结果计算由仪器配套计算机自动完成。
    1.2.6
 确定正常参考值的方法 在比较均数加减标准差法与百分位数法的基础上,从诊断实际出发制订正常参考值。
    2
 结 果
    2.1
 血清锌及全血锌测量值 样本量为120例。血清锌均数为11.9μmol/ L ,标准差为3.49 ,中位数为11.50 。全血锌均数为66.54μmol/ L ,标准差为8.52 ,中位数为67.60μmol/L 。第5 百分位血清锌值为7.36μmol/ L , 30 百分位数为9.50 ; 40 百分位数为10.42 ; 5 百分位全血锌值为50.48μmol/ L ,30 百分位数为62.48 ;40 百分位为64.94
    2.2
 分布检验 血清锌测量值呈正偏态尖峭峰分布。全血锌测量值呈负偏态尖峭峰分布。
    2.3
 火焰原子吸收光谱法测定微量全血锌的灵敏度与特异度 以火焰原子吸收光谱法所得血清锌测定值作为金标准”,即血清锌测定法判断为阳性者属于真阳性病人评价火焰原子吸收光谱法测定微量全血锌简称微量全血锌测定法的灵敏度与特异度。当血清锌测定法阳性锌缺乏判断标准为9.50μmol/ L ,微量全血锌测定法阳性锌缺乏判断标准为62.50μmol/L, 后者的灵敏度为82.05% ,特异度为87.65 %。当血清锌测定法阳性判断标准为10.10μmol/ L ,微量全血锌测定法阳性判断标准为64.30μmol/ L,后者的灵敏度为92.50 % , 特异度为87.5 % , 假阴性率漏诊率7.5 % ,假阳性率误诊率12.5%。当血清锌测定法阳性判断标准为10.42μmol/ L ,微量全血锌测定法阳性判断标准为64.94μmol/ L,后者的灵敏度降为87.8 % ,特异度降为86.07 %
    3
 讨 论
    
正常参考值的常用表示方法是均数加减标准差法。应用该表示方法的前提是,诸测量数据的频数分布呈正态。如前所述,微量全血锌测定法诸测量数据呈偏态分布。此外,应用这种表示方法都假定患病率为5 % ,这与实际情况不符。正常参考值的另一常用表示方法是百分位数法。这种表示方法同样假定锌缺乏患病率为5 %。我们应用这一标准在人群中进行锌缺乏筛选,其结果与临床表现的符合率很低。所以这两种方法均不适用于制订全血锌的正常参考值。
    
根据文献资料和实验,取第30百分位数血清锌测量值作为阳性分界值即金标准”,评价第30 百分位数微量全血锌测量值待评价标准的灵敏度和特异度。结果显示,灵敏度为82.05 % , 特异度为87.65 %。将待评价标准改为64.30μmol/ L , 则灵敏度提高至92.50 %( 漏诊率仅为7.50 %) ,特异度( 87.50 %)仍处于较高水平, 误诊率仅12.5 %。若将待评价指标改为第40 百分位数测量值64.94μmol/L ,则灵敏度降至87.80 % ,特异度降至86.07 %。所以,火焰原子吸收光谱法测定微量全血锌其正常参考值下限应订为64.30μmol/ L
参考文献
1
颜世铭,洪昭毅,李增禧.实用元素医学[M].郑州:河南医科大学出版社,1992,112.
2
阎正,蒋守规. 微量注射进样火焰原子吸收法测定耳血全血锌、铜及幼儿正常参考值的获得[J ] . 光谱学与光谱分析,1993 ,13(2) :71-72.
3
韦国铭. 脉冲进样原子吸收光谱法直接测定全血中的铁、锌、铜[J ] . 广西预防医学,1989 ,4 (3) :170 - 171.

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